Ìpinnu Àkóónú Oxalic Acid nínú Àwọn Èso àti Ewébẹ̀ nípasẹ̀ High-Performance Liquid Chromatography (HPLC)

Ìpinnu Àsídì Oxalic Àkóónú nínú Àwọn Èso àti Ewébẹ̀ nípasẹ̀ High-Performance Liquid Chromatography (HPLC)
1. Ìlànà Ìdánwò àti Ọ̀nà Ìṣètò
Gẹ́gẹ́ bí ásíìdì organic tí ó wọ́pọ̀ nínú èso àti ewébẹ̀, iye ásíìdì oxalic ní ipa taara lórí adùn àti ìníyelórí oúnjẹ. Ìdánwò yìí lo ìyípadà-àkókò high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). Lábẹ́ àwọn ipò acidic mobile phase, ásíìdì oxalic ni a yà sọ́tọ̀ kúrò nínú àwọn ohun tí ó ń dí i lọ́wọ́ nípa lílo ọ̀wọ̀n chromatographic C18. A lo ẹ̀rọ ìwádìí ultraviolet tí a ṣètò ní 210 nm fún ìṣàyẹ̀wò iye, tí ó dá lórí àwọn ànímọ́ ìfàmọ́ra UV ti àwọn ẹgbẹ́ carboxyl nínú àwọn molecule oxalic acid.
2. Ìtẹ̀síwájú àti Ìmúrasílẹ̀ Àpẹẹrẹ
A lo ọ̀nà ìyọkúrò gradient láti pèsè àwọn omi ìtúpalẹ̀: wọ́n 25.0 mg ti oxalic acid dihydrate dáadáa kí o sì fi omi ultrapure pò ó sí 25 mL láti rí omi ìtúpalẹ̀ 1 mg/mL. A máa ń fi omi ìtúpalẹ̀ pò ó sí oríṣiríṣi omi ìtúpalẹ̀ ní 50, 100, 200, 400, àti 800 µg/mL, pẹ̀lú ìwọ̀n kọ̀ọ̀kan tí a fi sínú omi mẹ́ta.
Fún ìpèsè àpẹẹrẹ, a lo ìyọkúrò tí a fi sínú máìkírówéfù: wọn 5.00 g èso/ewébẹ̀ homogenate, fi 10 mL ti omi 0.1 mol/L hydrochloric acid kún un, fi máìkírówéfù tọ́jú rẹ̀ ní 60°C fún ìṣẹ́jú mẹ́wàá, yọ àlẹ̀mọ́ inú àlẹ̀mọ́ 0.45 µm, kí o sì kó àlẹ̀mọ́ náà jọ fún ìdánwò.
3. Ṣíṣe àtúnṣe sí àwọn ipò Chromatographic
Ìpele alágbékalẹ̀ náà jẹ́ ètò 0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate buffer (pH 2.5)–acetonitrile (95:5), pẹ̀lú ìwọ̀n ìṣàn ti 0.8 mL/min àti ìwọ̀n otútù ọ̀wọ̀n ti 35°C. Ṣíṣe àtúnṣe ìwọ̀n acetonitrile fihàn pé nígbà tí ìpele organic bá ju 10% lọ, àkókò ìpamọ́ oxalic acid máa ń dínkù sí ìṣẹ́jú 3, ṣùgbọ́n ìpele gíga máa ń wáyé. Lábẹ́ àwọn ipò tí a ti ṣe àtúnṣe ìkẹyìn, àkókò ìpamọ́ oxalic acid jẹ́ ìṣẹ́jú 4.2, tí ó ń yọrí sí ìyàsọ́tọ̀ pátápátá kúrò nínú citric acid àti malic acid tí ó wà nítòsí (ìpinnu > 1.5).
4. Ìjẹ́rìísí Ọ̀nà
Ìjẹ́rìísí ìwọ̀n ìlà líníà fi ìbáṣepọ̀ onílà tó dára hàn láàrín agbègbè òkè àti ìfọkànsí ní ìwọ̀n 10–1000 µg/mL (R² = 0.9993). Ààlà ìwádìí (LOD), tí a pinnu nípasẹ̀ ọ̀nà ìpíndọ́gba àmì-sí-ariwo, jẹ́ 0.5 µg/mL. Nínú àwọn ìdánwò ìtúnṣe, RSD fún àwọn ìpinnu ìtúnṣe mẹ́fà ti àyẹ̀wò spinach kan náà jẹ́ 1.8%. Àwọn ìdánwò ìtúnṣe Spike ní ìpele mẹ́ta (80%, 100%, àti 120%) mú àròpín ìtúnṣe ti 98.2%, 102.4%, àti 97.8%, lẹ́sẹẹsẹ, tí ó bá àwọn ohun tí a béèrè fún ìṣàyẹ̀wò iye mu.
5. Ìṣàyẹ̀wò Àwọn Àpẹẹrẹ Tòótọ́
A dán àwọn èso àti ewébẹ̀ mẹ́fà tí wọ́n wà ní ọjà wò: spinach (356 ± 12 mg/100 g), seleri (215 ± 9 mg/100 g), tòmátì (18 ± 2 mg/100 g), ápù (6 ± 1 mg/100 g), ọ̀gẹ̀dẹ̀ (a kò rí), àti broccoli (89 ± 5 mg/100 g). Ìfiwéra pẹ̀lú ọ̀nà ìṣàpẹẹrẹ orílẹ̀-èdè (GB 5009.277-2016) fihàn pé ìyàtọ̀ ìbátan láàárín àwọn ọ̀nà méjèèjì kéré sí 5%, èyí tí ó fi hàn pé ọ̀nà yìí ṣeé gbẹ́kẹ̀lé. Ní pàtàkì, ọ̀nà HPLC fi ìmọ̀lára gíga hàn ju àwọn ọ̀nà titration ìbílẹ̀ lọ nígbà tí a bá ń ṣàyẹ̀wò àwọn àpẹẹrẹ tí kò ní akoonu púpọ̀.
6. Àwọn Àkíyèsí Pàtàkì
Ṣàkóso iye pH náà dáadáa nígbà tí a bá ń ṣe àyẹ̀wò ṣáájú ìtọ́jú. Tí pH inú èròjà náà bá ju 3 lọ, òjò calcium oxalate yóò yọrí sí àbájáde ìdánwò tí kò tó nǹkan. Ó yẹ kí a máa pèsè ìpele tí ó wà ní ìpele náà ní tuntun lójoojúmọ́ kí ó má ​​baà rọ̀ kí iyọ̀ má sì dí àwọn ọ̀wọ̀n náà. Lẹ́yìn gbogbo abẹ́rẹ́ ogún, fi acetonitrile–omi (30:70) fọ ọ̀wọ̀n náà fún ìṣẹ́jú 30 láti dènà ìbàjẹ́ ìṣiṣẹ́ ọ̀wọ̀n náà. Fún àwọn àyẹ̀wò tí ó ní àwọ̀ pupa (fún àpẹẹrẹ, ewébẹ̀ aláwọ̀ elése), a gbani nímọ̀ràn láti fi ìgbésẹ̀ ìwẹ̀nùmọ́ ìyọkúrò onípele líle kún un kí a tó fún un ní abẹ́rẹ́.
7. Ìtọ́ni fún Ìlò àti Ìfàsókè
A le fa ọna yii siwaju si wiwa oxalic acid ninu awọn ayẹwo biological biology bi ito ati ẹjẹ. Nipa ṣiṣatunṣe akojọpọ ipele alagbeka (fun apẹẹrẹ, fifi tetrabutylammonium hydroxide kun), oxalic acid ati awọn metabolites rẹ ni a le pinnu ni akoko kanna. Ti a ba papọ pẹlu mass spectrometry detector, a le fi ọna wiwa trace ti o peye diẹ sii mulẹ. Ninu ile-iṣẹ iṣelọpọ ounjẹ, ọna yii le pese atilẹyin data pataki fun yiyan awọn oriṣiriṣi acid kekere-oxalic ati imudarasi awọn ilana sise.